### HCC-827细胞培养指南

#### 一、细胞培养条件

细胞名称：HCC-827 人非小细胞肺癌细胞

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基+10% FBS

传代方法：推荐第一次传代比例为1:2，传代后每2天更换培养基

备注：使用无菌离心管收集培养基，以备对比培养。如对比效果不佳，建议直接采购尊龙凯时提供的完整培养基。

#### 二、细胞处理及培养

在收到细胞后，培养至良好状态，加入完整培养液并封好瓶口是最佳的运输细胞方法。使用75%酒精消毒细胞瓶，转入超净台进行无菌操作。在37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后进行后续处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片，以便进行售后支持（建议使用40x、100x、200x各一张）。前三天的照片为重要售后依据，若未提供，则默认细胞状态良好。注意：密封培养瓶放入培养箱时需松开瓶盖，传代时一瓶使用原有的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比。

#### 三、细胞培养步骤

**a、细胞传代：**

如果细胞汇合度未超过80%，将培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基放入37℃、5% CO2孵箱；当细胞密度超过80%时，进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱消化1-2分钟，随后在显微镜下观察细胞消化情况。如大多数细胞变圆并脱落，迅速将培养瓶取回，轻轻敲打后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，将悬液转移至15ml离心管，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清液并加入1-2ml完全培养基重新悬浮。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

**b、细胞冻存：**

1. 当细胞覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，用PBS清洗一次；
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞是否变圆，然后加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落，转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml尊龙凯时提供的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱。如需要转入液氮罐，必须在-80℃保存24小时后再转移。

**c、细胞复苏：**

1. 从液氮中取出细胞冻存管，迅速放入37℃水浴解冻至无晶体形成，随后用75%酒精擦拭冻存管外壁；
2. 将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2培养箱中；
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

#### 四、注意事项

某些细胞可能在运输过程中脱落，这是正常现象。收集所有培养液至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清液进行过渡培养，沉淀后加入胰酶1-2ml，轻打重悬后消化1-2分钟，加入5ml完全培养基终止反应，再离心，弃去上清，添加1-2ml完全培养基重悬。按照1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

#### 五、售后条款

1）细胞若出现问题，重发的情况包括：

1. 细胞运输中遭遇问题，如丢失、瓶身破损或培养液漏液，将予以重发；
2. 细胞污染问题需在收到产品48小时内提供真实实验结果，经核实后重发；
3. 常温发货细胞静置24小时后，干冰发货细胞复苏后24小时未存活（需提供真实细胞状态照片），将予以重发；
4. 如干冰发货的细胞复苏后24小时内或常温发货的细胞在静置4小时后便发生污染，将进一步处理；
5. 细胞活性问题需在7天内提供真实实验结果，用台盼蓝染色法检测，再决定是否重发；
6. 收到细胞当天及后2、3天内拍摄照片，若未告知将视为合格，若在4-7天内出现的问题需提供前三天照片和细胞操作步骤，由技术人员判定责任；

2）若细胞出现问题将不予重发的情况包括：

1. 客户导致的细胞污染；
2. 客户操作不当影响细胞状态；
3. 使用非推荐培养体系导致的状态不佳；
4. 未提供培养前3天照片的情况；
5. 在培养过程中经其他处理的情况；
6. 收到细胞后2天未告知的情况；
7. 具体情况待定。