尊龙凯时大鼠原代脂肪间充质干细胞提取实验流程

1. 实验材料准备

选择2周龄、体重约200克的SD大鼠作为实验对象。准备必要的无菌器械，包括镊子、眼科直剪、眼科弯剪和磁珠等。同时，准备5mL注射器、0.22μm滤器、泡沫板以及图钉以固定大鼠。使用75%乙醇进行器械消毒。实验所需的无菌PBS水、15mL和50mL无菌离心管、细胞筛和无菌培养瓶等也需提前准备。此外，需要制备SD大鼠脂肪间质干细胞的完全培养基。

2. 实验操作

将所有所需物品放置于超净工作台上，进行紫外线消毒30分钟。配制约5mL的0.1% I型胶原酶，并进行过滤除菌。处死大鼠后，将其颈部脱离，并在75%酒精中浸泡2-3分钟，再放回超净工作台固定在泡沫板上。

剪开大鼠腹股沟部位的皮肤，直至腹腔，以暴露脂肪组织。小心剪取脂肪组织，将其放入PBS中，注意避免剪到血管。利用PBS清洗脂肪组织，剔除多余的血管和淋巴结。将脂肪组织剪成适宜大小（如2mm×2mm），加入胶原酶，置于37℃下进行消化，同时每隔5分钟震荡一次或持续搅拌。消化完成后，将细胞悬液转移至离心管中，进行离心，弃去上层脂滴泡沫和上清液，并用培养基重悬沉淀。

对细胞悬液进行过滤，再次进行离心后弃去上清液，用培养基重悬并接种至培养瓶中。最后，将培养瓶置于37℃、含5% CO2的培养箱中进行培养。

3. 注意事项

在实验过程中，务必保持无菌操作，以避免细胞污染。剪取和清洗脂肪组织时需细致，以防损伤细胞或引入杂质。消化过程中要严格控制时间和温度，以避免过度消化导致细胞损伤。离心和过滤操作应轻柔进行，避免细胞损失或破裂，以确保提取的干细胞质量，进一步推动生物医学研究和应用。

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