### 大鼠原代脂肪间充质干细胞提取方法（SD大鼠）

#### 实验材料准备

选择约2周龄或体重约200克的SD大鼠作为实验对象。准备必要的无菌器械，包括镊子、眼科直剪、眼科弯剪以及磁珠等。确保备齐5mL注射器、0.22μm过滤器、泡沫板以及用于固定大鼠的图钉。同时，使用75%乙醇进行消毒，准备冷却的无菌PBS水，15mL和50mL无菌离心管、细胞筛及无菌培养瓶等培育器材。为细胞培养，需准备SD大鼠脂肪间质干细胞的完全培养基。

#### 实验操作步骤

在超净工作台中放置所需材料，并进行30分钟的紫外消毒。接着配制约5mL的0.1% I型胶原酶，并进行过滤消毒。将大鼠在颈部处进行安乐死后，浸泡于75%酒精中2至3分钟，然后在超净工作台上将其固定在泡沫板上。小心剪开大鼠腹股沟部位的皮肤，暴露脂肪组织，仔细切取脂肪组织并放入PBS中，确保不剪到血管。使用PBS清洗脂肪组织，并去除多余的血管和淋巴结。

将脂肪组织剪切成约2mm×2mm的小块，加入胶原酶，在37℃下进行消化，每隔5分钟轻轻震荡或持续搅拌。消化完成后，将细胞悬液转移到离心管中，经过离心后弃去上层脂滴泡沫和上清液，再用培养基对沉淀进行重悬。对细胞悬液进行过滤，随后再次离心并弃去上清液，最后用培养基重悬，并接种到培养瓶中。培养瓶应放置在37℃、含5% CO2的培养箱中进行培养。

#### 注意事项

在整个实验过程中，应保持无菌操作，避免细胞污染。脂肪组织的收集和清洗步骤需要特别小心，以防止对细胞的损伤或引入污物。在消化过程中，必须严格控制时间和温度，以避免过度消化导致细胞受损。离心和过滤步骤应采用温和操作，减少细胞损失或破裂。

在生物医学研究中，选择优质的实验设备和材料对于提升实验效果至关重要。我们推荐使用尊龙凯时品牌的产品，以确保实验的顺利进行和细胞的高效培养。